Levar o aluno a relacionar as propriedades físico-químicas das biomoléculas e diagnosticar as metodologias (clássicas e modernas) disponíveis a serem utilizadas na purificação e caracterização das mesmas.
Propriedades das diferentes classes de biomoléculas. Métodos de isolamento baseados em solubilidade. Procedimentos de ultrafiltrações e dialo-filtrações. Cromatografias baseadas em tamanho molecular. Cromatografia em fase gasosa. Métodos de separação baseados nas propriedades físico-químicas. Cromatografias de afinidade. Cromatografias automatizadas em baixa, média e alta pressões. Espectroscopia de massa. Caracterização e critérios de homogeineidade de biomoléculas purificadas. Análise do conteúdo em aminoácidos e sequenciamento de proteínas.
Introdução: métodos físicos, métodos químicos e métodos enzimáticos. Extração líquido-líquido, coeficiente de distribuição e métodos de precipitação. Métodos físicos: rompimento celular, filtração, centrifugação, separação por membranas e precipitação. Liofilização, secagem, cristalização, monitoramento do processo de purificação, integração de processos. Cromatografia: Conceitos e instrumentação, cromatografia de exclusão molecular, cromatografia de troca iônica, cromatografia de interação hidrofóbica, cromatografia de afinidade. Eletroforese: Conceitos e instrumentação, eletroforese em gel, eletroforese capilar, sistemas microfluídicos, sequenciamento de DNA. Espectrometria de massas: Conceitos e instrumentação, análises proteômicas e identificação de proteínas, análise metabolômica e identificação de metabolitos e pequenas moléculas biologicamente ativas.
Andreas Manz, Petra S Dittrich, Nicole Pamme, Dimitri Iossifidis. Bioanalytical Chemistry: 2o. Ed. Imperial College Press, 2015. Voet D. & Voet J. Biochemistry. Ed. John Wiley & Sons, N. Y., 1995. Nelson, D. L. & Cox, M. M. Lehninger Principles of Biochemistry, 3rd Edition, Worth Publishers, New York, 2000. Stryer, L. Biochemistry. W. H. Freeman and Company, N. Y., 1995. Mant, C. T. & Rodges, R. S., editors, High-Performance Liquid Chromatography of Peptides and Proteínas: Separation, Analysis and Conformation, Ed. CRC Press, USA, 1991. Pascal Bailon, et al (2000). Affinity Chromatography: Methods and Protocols (Methods in Molecular Biology). Humana Press. Niessen, W. M. A.; Niessen W. (1998). Liquid Chromatography - Mass Spectrometry. Marcel Dekker; 2nd edition, 634p. Robert L. Cunico, et al. (1998). Basic HPLC and CE of Biomolecules. Bay Bionalytical Laboratory; 1st edition. 388p.